Cy3-NHS ester是一种常用的荧光标记试剂，用于将Cy3荧光染料引入生物分子中，如抗体、蛋白质和核酸，以进行细胞成像、流式细胞仪分析、免疫荧光染色等实验。以下是使用Cy3-NHS ester标记抗体或蛋白质的一般实验步骤：
实验准备：
1.Cy3-NHS ester：根据您的实验需要，制备适当浓度的Cy3-NHS ester溶液。通常在有机溶剂如DMSO中制备。
2.抗体或蛋白质：确保您的抗体或蛋白质处于适当的缓冲液中，以维持其稳定性。
3.缓冲液：选择适当的碳酸氢盐缓冲液，通常pH为8.5-9.0。
步骤：
1.准备Cy3-NHS ester溶液：
- 从冷冻存储中取出Cy3-NHS ester并尽快溶解在有机溶剂（例如DMSO）中，制备适当浓度的溶液。
- 注意：Cy3-NHS ester的溶液在光下不稳定，所以要在暗处工作。
2.反应混合物：
- 将Cy3-NHS ester溶液小心地加入到抗体或蛋白质的缓冲液中，以获得所需的浓度。确保混合物均匀混合。
3.反应保护：
- 在室温下或4°C下，将混合物保护反应1-2小时，以确保反应充分进行。
- 反应时间可能会因使用的Cy3-NHS ester浓度和生物分子类型而有所变化。
4.净化：
- 使用凝胶过滤、离心或柱层析等方法，去除未反应的Cy3-NHS ester和其他杂质，以纯化标记的抗体或蛋白质。
5.验证：
- 使用吸收光谱和荧光光谱验证标记的抗体或蛋白质的荧光性质。通常，Cy3的激发波长约为550 nm，发射波长约为570 nm。
6.存储：
- 存储标记的抗体或蛋白质在-20°C或更低温度下，远离光线和潮湿环境，以避免荧光信号的退色。
这些步骤提供了一个一般性的指南，但请注意，具体的实验条件和步骤可能会因您的实验需求和生物分子的特性而有所不同。在进行标记实验之前，最好查阅相关文献或与同事进行讨论，以确保您的实验设计和步骤是适合您的研究的。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料, stargraydye暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于实验室环境)
SiR-PEG4-alkyne
CY7 amine
FITC-Alkyne
FITC-MAL
Sulfo-CY5 COOH
FITC-PEG-Alkyne
CY5 DBCO
Sulfo-CY5 DBCO
5-TAMRA alkyne
FITC-Biotin
CY3 hydrazide
ICG-COOH
