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荧光标记长片段双链DNA的应用

时间:2022-09-20    阅读:928    点赞:0

长片段核酸多指长度大于一百多个碱基的双链DNA片段,长片段双链DNA的荧光标记方法分为化学标记法和酶催化标记法。

 

化学标记是通过用化学试剂处理核酸序列,已达到添加荧光标记的效果,如通过用亚硫酸钠处理序列中的胞密啶,使之变成磺酸衍生物,后者与二胺或肼耦合,可衍生连接上许多荧光标记染料。

 

但常用的是酶催化标记法——使用限制性酶、激酶、转移及聚合酶等,通过缺口平移、随机引物、末端标记或PCR等技术标记到长片段DNA分子上。其中,PCR标记法可以直接利用荧光标记寡核苷酸作为引物,直接进行常规扩增反应,其扩增产物即为荧光标记的长片段 DNA;或者是将荧光标记的三磷酸脱氧核糖核(dNTP)加到反应体系中,扩增产物也能带上荧光标记。这种标记法简便、快速、重复性好,对模板DNA纯度的要求低。

 

荧光标记长片段双链DNA主要应用于生物技术及仪器,如生物芯片中的基因芯片(微阵列芯片)技术和微流控芯片技术、基因分型、DNA测序,以及遗传分析仪等。基因芯片技术主要依赖于荧光标记长片段双链 DNA 的特异性杂交,达到检测靶核酸分子的目的。此外,荧光标记长片段双链DNA常用于遗传分析仪。

 


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