荧光素FITC是较为常用的标记抗体的方法,并应用于流式细胞术的细胞免疫学检测及免疫分析等实验中,下面小编从荧光素的选择搭配和制备保存来介绍:
选择搭配:
01流式细胞仪的配置
仪器需配备可激发相应荧光素的激光管;对于多荧光素实验,仪器可同时检测多种细胞荧光。
02
染料的亮度与抗原表达量
低表达量的抗原,应使用高亮度荧光素;高表达量的抗原,应使用低亮度荧光素。
03荧光素之间的光谱重叠
光谱重叠严重的荧光素检测会导致荧光溢漏,干扰检测结果,应选择光谱重叠小的荧光素组合。
04
复合染料联合使用的选择
常见的复合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等,复合染料的信号衰退会降低APC或PE的灵敏度,避免复合染料联合使用带来的假阳性。
05
红色激光激发自发荧光样本
荧光通道可观察到自发荧光,对自发荧光较强的细胞,选择红光激发,发射波长长的荧光素可得到较好的S/N比值;对自发荧光比较弱的细胞,发射波长长的荧光素对S/N提高没有改善。
制备保存:
(1)以4℃或-20℃低温保存,防止抗体活性降低和蛋白质变性。
(2)加入硫柳汞或叠氮钠防腐。
(3)真空干燥后更易长期保存。