免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)创于20世纪40年代初,首次是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。当时由于异氰酸荧光素标记物的性能较差,未能推广使用。
下面是免疫组化荧光标记的步骤
1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
3. 稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 ul 抗体,应能盖住切片)。
4. 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。
5. 以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
6. 稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 ul 抗体)。
7. 将第二抗体加于切片上,置加湿盒中室温温育1 h,以PBS洗玻片3次(5 min/次)。
8. 将盖玻片放于纸巾上,滴加1滴Gelvatol 于盖玻片中央。翻过载玻片放于盖玻片上(勿施压),将玻片置工作台上,用铝箔覆盖避光放置30 min,使Gelvatol 凝结。
9. 显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。
免疫荧光标记技术(immunofluorescencetechnique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,可用于(1)检查抗原抗体结合部位(2)免疫学和组织学检测。