一、引言
5-FAM SE(5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯)是一种应用于生物医学研究和生物成像领域的荧光标记试剂。它结合了荧光素的高荧光量子产率和琥珀酰亚胺酯的反应性,可以与蛋白质、多肽和其他生物分子上的氨基基团发生特异性反应,从而实现荧光标记。
二、产品概述
5-FAM SE是一种明亮的绿色荧光染料,具有荧光稳定性和水溶性。其琥珀酰亚胺酯基团能够与生物分子上的氨基基团发生反应,形成稳定的酰胺键,从而实现荧光标记。由于其高荧光亮度和良好的生物相容性,5-FAM SE在流式细胞仪分析、免疫印迹、荧光显微镜成像等领域具有诸多应用。
三、使用(建议现配现用,溶解后尽快使用。不要溶解后保存)
溶解与制备
将5-FAM SE粉末溶解于适当的溶剂中,如DMSO、DMF等。注意在溶解过程中避免剧烈搅拌或震荡,以防荧光猝灭。
根据实验需求,制备成所需浓度的5-FAM SE溶液。
标记反应
将待标记的生物分子(如蛋白质、多肽、抗体等)与5-FAM SE溶液混合,确保两者充分接触。
在适当的反应条件下(如室温、避光、搅拌等)进行反应,使5-FAM SE与生物分子上的氨基基团发生特异性反应,形成稳定的酰胺键。
反应时间根据生物分子类型和实验需求而定,请参照相关文献或咨询专业人士。
纯化
反应完成后,使用适当的纯化方法(如透析、凝胶过滤、离心等)去除未反应的5-FAM SE和其他杂质,得到纯化的标记产物。
检测与分析
使用荧光光谱仪、荧光显微镜等设备对标记产物进行检测和分析。通过比较不同条件下荧光信号的强度和变化,了解生物分子的表达、定位和相互作用等信息。
四、储存条件
将5-FAM SE应储存于-20℃以下的冰箱中,避免反复冻融和长时间暴露于室温下。长时间暴露于空气中或高温环境可能导致荧光减弱或猝灭。对于已溶解的5-FAM SE溶液,建议在制备后尽快使用,以避免荧光性能下降。
五、注意事项
5-FAM SE具有光敏感性,请在避光条件下进行操作和储存。
在使用过程中,注意避免与强氧化剂、还原剂或酸碱物质接触,以免影响产品的荧光性能。
标记反应过程中,请确保生物分子与5-FAM SE充分接触,以提高标记效率。
在进行实验时,请遵循实验室安全规范,佩戴适当的防护设备。
六、常见问题解答
问:如何判断标记反应是否成功?
答:可以通过荧光光谱仪或荧光显微镜检测标记产物的荧光信号来判断反应是否成功。如果标记产物的荧光信号强度明显增强,则说明标记反应成功。
问:如何优化标记反应条件?
答:标记反应条件的优化可能涉及反应时间、温度、pH值等多个因素。建议根据实验需求,参考相关文献或咨询专业人士,逐步调整和优化反应条件。
问:如何处理未反应的5-FAM SE?
答:对于未反应的5-FAM SE,可以通过透析、凝胶过滤或离心等方法进行去除。确保在后续的实验步骤中不再使用含有未反应试剂的溶液。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)