CY5.5 NHS Ester,作为一种脂溶性的荧光菁染料,不仅继承了传统菁染料高荧光量子产率、良好光稳定性及长波长发射等优点,还因其NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)酯官能团的引入,实现了对生物分子的特异性标记。
结构特性
CY5.5 NHS Ester属于花青素类荧光染料,其核心结构由两个吲哚环通过甲川桥连接而成,形成高度共轭的π电子体系。这种结构赋予了CY5.5染料优异的荧光性能,其最大激发波长通常在650-670nm之间,最大发射波长则位于670-690nm的近红外区域。此外,NHS酯官能团的引入,使得CY5.5 NHS Ester能够通过酰胺化反应与生物分子中的氨基(如蛋白质、抗体、肽类等的伯胺或仲胺)快速且特异性地结合,形成稳定的共价键。
应用优势
近红外荧光特性:CY5.5 NHS Ester的近红外发射波长能够穿透较深的生物组织,减少背景荧光干扰,提高成像的信噪比和深度穿透能力。
生物标记:NHS酯官能团与生物分子的氨基反应效率高,标记过程简单快捷,适用于多种生物分子的标记需求。
良好的光稳定性:CY5.5荧光团的光稳定性保证了在长时间成像或动态监测过程中荧光强度的稳定性。
脂溶性设计:CY5.5 NHS Ester的脂溶性设计使其更容易穿透细胞膜,进入细胞内进行标记,拓宽了其在细胞生物学研究中的应用范围。
使用方法
准备工作
确认目标生物分子:确保已准备好含有氨基的目标生物分子。
计算所需量:根据实验需求和CY5.5 NHS Ester的摩尔消光系数,计算所需标记量。
溶解CY5.5 NHS Ester:使用适当的有机溶剂(如DMSO、DMF等)溶解CY5.5 NHS Ester,制备成一定浓度的溶液。注意避免使用含有氨基的溶剂。
标记反应
调整pH值:将目标生物分子溶液调整至适宜的pH值(通常为7.2-8.5),以促进酰胺化反应的进行。
混合反应物:将溶解好的CY5.5 NHS Ester溶液逐滴加入到目标生物分子溶液中,边加边轻轻搅拌,确保反应均匀进行。
控制反应条件:根据实验需要,设定合适的反应温度和时间。通常,室温下反应数小时至过夜即可获得满意的标记效果。
终止反应:通过添加适量的缓冲液或稀释剂来终止反应,并准备进行后续的纯化步骤。
纯化与验证
纯化标记产物:使用透析、凝胶过滤等方法去除未反应的CY5.5 NHS Ester和其他杂质。
验证标记效果:通过光谱分析(如紫外-可见吸收光谱、荧光光谱)、SDS-PAGE电泳或质谱等方法验证标记产物的纯度和荧光特性。
CY5.5 NHS Ester作为一种脂溶性荧光菁染料,在生物医学研究、药物发现及生物成像等领域展现出诸多应用前景。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)