CY5.5 NHS(N-羟基琥珀酰亚胺酯)是一种常用的近红外荧光染料,应用于生物医学研究中。其独特的近红外发射波长(约670nm)使得CY5.5 NHS在复杂生物样本中具有较深的组织穿透能力和较低的背景荧光干扰,从而提高了成像的清晰度和准确性。
结构与特性
CY5.5 NHS染料的核心结构基于Cyanine 5.5,通过引入N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)活性基团,使其能够与含有氨基(如蛋白质、抗体、肽类等)的生物分子发生的酰胺化反应,从而实现荧光标记。该染料具有高光稳定性和较宽的斯托克斯位移,适用于多种荧光成像技术。
包装与存储
CY5.5 NHS产品通常以干粉或溶液形式提供,并储存在避光、干燥、低温(-20℃以下的冰箱中,避免反复冻融)条件下。使用前请检查包装是否完好无损,避免长时间暴露于光照或高温环境中。
使用前准备
溶解与稀释
溶解:根据科研实验浓度,使用无水DMSO(二甲基亚砜)等将CY5.5 NHS干粉溶解。注意,溶解过程中应避免剧烈搅拌和高温加热,以免破坏染料结构。
稀释:根据实验需求,将溶解后的CY5.5 NHS溶液用适当的缓冲液(如PBS、TBS等)稀释至所需浓度。稀释过程应在避光条件下进行,以防荧光淬灭。
标记反应
反应条件
pH值:标记反应通常在弱碱性条件下进行(如pH 7.2-8.5),以促进酰胺化反应的进行。
反应时间:根据目标生物分子的性质和反应体系的复杂程度,反应时间可能有所不同。一般建议室温下反应1-4小时,或根据实验条件进行优化。
反应温度:室温下即可进行,无需额外加热。如需加快反应速度,可适当提高温度(但不超过37°C),同时注意监测染料和生物分子的稳定性。
纯化与检测
纯化:标记反应完成后,通常需要通过透析、凝胶过滤或离心等方法去除未反应的染料和其他杂质,以获得纯化的荧光标记物。
检测:使用荧光分光光度计或流式细胞仪等仪器检测标记物的荧光强度和特异性。同时,可通过SDS-PAGE、Western Blot等方法验证标记物的纯度和分子量。
CY5.5 NHS作为一种近红外荧光标记工具,在生物医学研究中具有诸多应用前景。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)