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荧光标记抗体检测技术-直接法、间接法、双标记法优缺点介绍

时间:2023-03-06    阅读:2968    点赞:0

荧光抗体技术,用荧光物标记抗体来检测细胞或组织中相应抗原或抗体的技术。荧光物种类一般有异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明荧光素、二氯三嗪基氨基荧光素等。一般是将待测标本固定于玻片表面,滴加已知荧光抗体后再以缓冲液冲洗,干燥后于荧光显微镜下观察阳性是可见带荧光的抗原抗体复合物; 阴性无荧光(因为带荧光的抗体不能与抗原结合,被冲冼掉)。该技术具有简单、特异性高、敏感性低、同时检测多种抗原时较复杂等特点。

 

1. 直接法

直接法是荧光抗体技术简单、基本的方法。它通过标记抗体直接与相应抗原(待检抗原标本)结合,来鉴定未知抗原。

 

其优点为:

①由于在反应中只有两种因子参与,结果判断较简单;

②特异性强,与其他抗原交叉染色较少;

③操作步骤少,方法简便、省时。

 

其缺点有;

①敏感性较差;

②一种标记抗体只能鉴定一种抗原;

③不能用于鉴定未知抗体。

 

2. 间接法

间接法是目前常用的方法。先用已知未标记的抗体(第一抗体)与待检抗原反应或用未知抗体与已知抗原反应,反应一定时间后,洗去未结合的抗体,再与标记的抗免疫球蛋白抗体(二抗)反应。在第一步反应中,若抗原抗体发生了反应,则抗体被固定在标本上,那么第二步反应中标记的抗体(二抗)必然与第一步反应形成的抗原抗体复合物中的抗体发生反应,这样就可以通过二抗的示踪,对标本中未知抗原或抗体进行鉴定。

 

其优点为;

①敏感性较高,是直接法的5-10倍;

②用一种标记的抗体,就能与一种以上的相应的抗体或抗原配合鉴定多种未知的抗原或抗体;

③既能鉴定未知抗原,又能鉴定未知抗体。

 

其缺点有

①在反应中有多种因子参与,容易产生非特异性染色,结果判断有时较困难;

②操作步骤多,费时。

 

3. 双标记法

双标记法是用两种荧光素(常用FITC和PE)分别标记特异性不同的抗体,用于检测同一标本中的不同抗原。此法常用于细胞表面抗原和受体的研究。

 

荧光标记抗体定制介绍:

荧光标记抗体Rituximab   

荧光标记生物素化抗GPC3抗体

荧光标记CD62P单抗

荧光标记CD42a单克隆抗体

荧光标记抗CD4抗体   

荧光标记的PCT单克隆抗体

荧光标记抗CD8抗体   

荧光标记抗CD3抗体   

荧光标记靶向CAIX的抗体

荧光标记抗CD69单克隆抗体/抗CD69-PerC

荧光标记到单克隆抗体anti-VEGF165-USPIO

荧光标记的抗CD63抗体

荧光标记P-糖蛋白抗原P-glycoprotein   Cy3-(P-GP)   

荧光标记鼠抗人MRP1单克隆抗体   Cy3-鼠抗人MRP1抗体

荧光标记重组人源化单克隆抗体SM09   Cy3-SM09

荧光标记抗马-干扰素单克隆抗体

荧光标记抗马IFN-γ单克隆抗体(SB10)

荧光标记抗牛IFN-γ单克隆抗体(CC302)

荧光标记莱克多巴胺单克隆抗体(RAC McAb)    Cy3-RAC McAb

荧光标记ICAM-1单克隆抗体   荧光标记ICAM-1抗体

荧光标记抗SEA抗体   抗葡萄球菌肠毒素A抗体

荧光标记抗CD15抗体  鼠单克隆抗体

荧光标记PD-1抗原

荧光标记CD45RA新克隆ZCH-6-3A4(简称3A4)单克隆抗体

荧光标记全抗原(AgSN)

荧光标记P-选择素单克隆抗体   P-选择素是一种膜糖蛋白

荧光标记单克隆抗体CD61     Cy3-CD61

荧光标记抗ICAM-1抗体

荧光标记抗驴

荧光标记抗绵羊/山羊

荧光标记抗鸡

荧光标记抗马

荧光标记抗兔

荧光标记抗狗

荧光标记抗牛

荧光标记的山羊抗大鼠IgG



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