Cy7.5 NHS Ester（Cyanine 7.5 N-羟基琥珀酰亚胺酯）是一种近红外荧光染料，以其强烈的荧光信号和优异的光化学稳定性，在生物医学研究中得到了应用。
一、实验前准备
1. 实验器材与试剂
在进行Cy7.5 NHS Ester标记实验前，需要确保所有实验器材和试剂齐全。主要包括：
Cy7.5 NHS Ester粉末
缓冲液（如磷酸盐缓冲液PBS）
有机溶剂（如DMSO、DMF）
待标记的蛋白质或其他生物分子（如抗体、寡核苷酸）
细胞裂解液（如需进行细胞实验）
离心机、移液器、分光光度计等实验设备
2. 实验环境
实验区域应保持干净整洁，防止环境污染和交叉污染。此外，了解实验的目的、原理、操作步骤和注意事项，确保实验操作的安全性和准确性。
二、Cy7.5 NHS Ester的溶解与配制
由于Cy7.5 NHS Ester是脂溶性的，需要先将其溶解在有机溶剂中，如DMSO或DMF，配制成母液。通常推荐浓度为10mg/ml。溶解过程中要确保充分搅拌，使Cy7.5 NHS Ester完全溶解。
三、标记（建议现配现用，溶解后尽快使用。不要溶解后保存）
蛋白质或其他生物分子的准备
将待标记的蛋白质或其他生物分子溶解在适当的缓冲液中，并测定其浓度。对于抗体等生物分子，如果含有其他杂质或溶于带氨基的缓冲液，需要在标记前进行纯化。
Cy7.5 NHS Ester与生物分子的反应
调节pH值：确保反应体系的pH值在7.0-8.5之间，这是Cy7.5 NHS Ester与生物分子有效反应的最佳pH范围。
加入Cy7.5 NHS Ester：根据Cy7.5 NHS Ester与生物分子的使用比例，计算所需Cy7.5 NHS Ester的体积，并缓慢加入到生物分子溶液中。同时，在暗处低速搅拌，室温下反应一定时间（如45分钟）。
去除未标记的Cy7.5 NHS Ester：通过透析或离心等方法去除未与生物分子结合的Cy7.5 NHS Ester。通常使用0.15M NaCl溶液进行透析，多次更换新鲜溶液，确保未标记染料完全去除。
标记产物的检测与分析
使用分光光度计测定标记产物在特定波长（如Cy7.5的激发波长788nm）下的吸光度，以验证标记效果。同时，可以通过荧光显微镜、流式细胞仪等设备对标记产物进行成像分析，观察其在细胞或组织中的分布。
四、注意事项
避免污染和交叉污染：Cy7.5 NHS Ester具有较高的荧光亮度，操作时应避免污染和交叉污染，以免影响实验结果。
实验条件优化：由于不同生物分子的性质不同，Cy7.5 NHS Ester的标记效果可能受到反应条件（如pH值、反应时间、温度等）的影响。因此，在实际应用中，可能需要进行实验优化以获得适宜的标记效果。
储存条件：Cy7.5 NHS Ester应在干燥、无水的条件下储存，避免水解。通常推荐在-20°C下避光保存。
Cy7.5 NHS Ester作为一种近红外荧光染料，在生物医学研究中具有诸多应用前景。通过合理的实验设计和操作步骤，可以将其有效地用于蛋白质或其他生物分子的标记，为细胞成像、蛋白质分析等领域提供有力的技术支持。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
