选择Cy5标记试剂的因素?
目标分子类型:蛋白、抗体、核酸、多肽、小分子等需选择不同反应基团的Cy5衍生物。
水溶性需求:水相反应需选磺化Cy5(水溶性好),有机相可选常规Cy5羧酸(需有机溶剂助溶)。
反应活性基团:根据分子表面官能团选择对应试剂(如-NHS酯针对氨基,-DBCO针对叠氮基团)。
荧光稳定性:磺化Cy5抗光漂白能力更强,适合长时成像;常规Cy5成本低但稳定性略逊。
实验场景:活体成像、体外细胞标记、流式检测等对波长和穿透性有不同需求(Cy5适合近红外成像)
Cy5标记试剂类型与适用场景:
磺化Cy5衍生物
常规脂溶性Cy5羧酸
选择流程:
明确实验目标
检测方式:活体成像(需近红外穿透性) vs. 体外细胞实验(常规荧光显微镜)。
分子类型:蛋白(选-NHS酯)、核酸(选点击化学试剂)、含巯基分子(选-Maleimide)。
评估溶解条件
水相体系:优先磺化Cy5(避免有机溶剂干扰生物活性)。
有机相体系:可选Cy5-COOH(需优化溶剂比例)。
匹配反应基团
分子表面官能团:氨基(-NHS酯)、巯基(-Maleimide)、叠氮基(点击化学试剂)。
注意事项
避光操作:所有Cy5试剂对光敏感,标记过程需在暗室或避光条件下进行。
纯化步骤:标记后需通过透析或柱层析去除游离染料,避免背景干扰。
浓度优化:过量染料可能导致分子聚集,建议进行摩尔比梯度测试。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)