5-FAM, SE羧基荧光素活性酯相关科研产品常见问答介绍,仅参考。
问: 5-FAM, SE 的主要用途是什么?
答: 5-FAM, SE 是一种荧光标记试剂,其琥珀酰亚胺酯(SE)基团可与蛋白质、抗体、肽链或其他含氨基(-NH₂)的生物分子共价结合,用于荧光标记。标记后的产物应用于荧光显微成像、流式细胞术、FRET(荧光共振能量转移)及分子探针构建等领域。
问: 如何保存 5-FAM, SE?是否需避光?
答: 需避光保存于-20°C干燥环境中。琥珀酰亚胺酯对水分和光照敏感,建议分装后密封保存,使用前平衡至室温以避免吸潮。
问: 标记反应后是否需要纯化?如何操作?
答: 是。未结合的5-FAM, SE需通过透析、凝胶过滤层析(如脱盐柱)或超滤离心去除,以降低背景荧光。推荐使用预装脱盐柱(如PD-10)快速纯化。
问: 5-FAM的最大激发/发射波长是多少?适用哪些检测仪器?
答: 最大激发波长~494 nm,发射波长~521 nm(绿色荧光)。适用于荧光显微镜(FITC通道)、流式细胞仪(488 nm激光)、酶标仪或荧光光谱仪。
问: 能否用于活细胞标记?
答:可以,但需优化条件。5-FAM, SE标记的分子(如抗体)需在无血清培养基中孵育,避免血清中氨基干扰。建议标记后纯化并验证细胞渗透性。
问: 与其他荧光素(如FITC)相比,5-FAM有何优势?
答: 5-FAM荧光量子产率更高,光稳定性优于FITC,且其羧酸基团(-COOH)更易与SE活化基团偶联,标记效率更高,背景更低。
问: 标记后产物出现沉淀或荧光减弱,可能原因是什么?
答: 可能原因:
反应pH过高(>9.5)导致蛋白质变性;
5-FAM, SE过量引发交联沉淀;
储存不当导致染料降解(检查避光与低温条件)。
问: 该产品适用于体内成像吗?
答: 不推荐。5-FAM的激发波长(~494 nm)在活体组织中穿透性较差,且易被血清清除。如需体内成像,建议选择近红外染料(如Cy5.5、ICG)。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)