Sulfo-Cy5.5-NH2科研常见问答,仅参考。
问: Sulfo-Cy5.5-NH2与普通Cy5.5-NH2有何区别?
答:
磺酸化基团:Sulfo-Cy5.5-NH2在分子中引入磺酸基团(-SO₃⁻),显著提高水溶性,减少有机溶剂(如DMSO)依赖,更适合体内实验(如活体成像)和生理缓冲液体系。
降低非特异性结合:磺酸化结构减少与蛋白质或细胞膜的疏水相互作用,降低背景荧光。
适用性:普通Cy5.5-NH2更适用于脂溶性环境(如细胞膜标记),而Sulfo-Cy5.5-NH2更适合水溶性标记(如抗体、核酸、纳米颗粒)。
问: 如何保存Sulfo-Cy5.5-NH2?避免哪些降解因素?
答:
保存条件:
固体粉末:-20°C干燥避光长期保存。
降解因素:
光照:长时间暴露于白光或紫外光会导致荧光淬灭。
氧化:避免与强氧化剂接触,溶解时建议用惰性气体(如氮气)保护。
高温:长期高温(>37°C)会加速分解。
问: Sulfo-Cy5.5-NH2是否适用于体内成像?有何优势?
答:
适用性:是,其近红外发射波长(~710 nm)可穿透深层组织,且磺酸化结构降低肝脏摄取,延长血液循环时间。
优势:
低背景:减少与血清蛋白的非特异性结合。
高信噪比:近红外窗口(NIR)成像中自体荧光干扰小。
生物相容性:水溶性好,适合静脉注射或局部给药。
问: 标记后的产物荧光强度低,可能是什么原因?
答:
可能原因及解决方案:
染料降解:检查保存条件(避光、低温),使用新鲜配制的染料溶液。
标记比例不足:增加染料:目标分子的摩尔比(需平衡标记效率与活性损失)。
环境干扰:避免标记体系中存在淬灭剂(如叠氮钠、高浓度重金属离子)。
激发/检测参数:确认仪器设置匹配Sulfo-Cy5.5-NH2的激发/发射波长(Ex/Em≈678/710 nm)。
问: Sulfo-Cy5.5-NH2是否可用于核酸标记?如何操作?
答:
适用性:是,尤其适合标记氨基修饰的DNA/RNA探针。
操作步骤:
活化染料:用EDC/NHS活化Sulfo-Cy5.5-NH2的羧基(若需与核酸氨基反应)。
反应条件:在pH 7.4-8.5缓冲液(如PBS)中,室温反应2-4小时。
纯化:通过乙醇沉淀、HPLC或凝胶电泳去除未结合的染料。
问: 标记后的Sulfo-Cy5.5-NH2-蛋白质偶联物在4°C下能稳定多久?
答:
稳定性:若纯化后保存在避光、无菌的PBS(含1% BSA或0.05%叠氮钠)中,通常可稳定4周左右。
活性验证:理论一般建议在标记后1周内完成实验,长期保存需分装冻存于-20°C(避免反复冻融)。
实际建议现用现溶,以免不稳定。
问: 能否将Sulfo-Cy5.5-NH2与点击化学(如DBCO、TCO)联用?
答:
兼容性:是,需通过化学修饰将Sulfo-Cy5.5-NH2与其他基团(如DBCO、TCO)偶联。
例如:将Sulfo-Cy5.5-NH2的氨基与含羧酸的点击化学试剂(如DBCO-COOH)通过EDC/NHS反应连接。
应用场景:适用于无铜点击化学标记(如活细胞内生物正交标记)。
问: Sulfo-Cy5.5-NH2是否适用于双光子显微镜成像?
答:
适用性:是,其激发波长可适配双光子显微镜的近红外飞秒激光(如800-900 nm)。
优势:双光子成像穿透深度更高,适合厚组织或活体成像。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)