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‌Sulfo-CY5-NHS‌科研产品问答,磺化水溶性CY5-NHS酯

时间:2025-03-27    阅读:28    点赞:0

‌Sulfo-CY5-NHS‌磺化水溶性CY5-NHS酯科研产品问答,仅科研:

问: Sulfo-CY5-NHS与普通CY5-NHS的主要区别是什么?适用场景有哪些?‌

答:‌

‌区别‌:

‌水溶性‌:Sulfo-CY5-NHS因磺酸基修饰,可直接溶于水或缓冲液,无需有机溶剂(如DMSO)。

‌电荷‌:带负电荷,减少与生物分子非特异性吸附,适合标记敏感蛋白或活细胞。

‌适用场景‌:

需避免有机溶剂的标记(如抗体、酶活性敏感分子)。

活细胞表面标记或体内注射(降低毒性)。

Sulfo-Cy5 NHS 

问: Sulfo-CY5-NHS在体内成像中的代谢途径是什么?‌

答:‌

‌代谢特点‌

‌快速清除‌:小分子探针经肾脏排泄(数小时内),大分子(如抗体)通过肝胆代谢(半衰期数天)。

‌成像窗口‌:建议注射后6-24小时采集信号(平衡背景与靶标富集)。

 

问: Sulfo-CY5-NHS能否用于FRET(荧光共振能量转移)实验?‌

答:‌

‌FRET设计‌:需配对供体染料(如FAM,Ex/Em ~495/520 nm):

‌供体-受体对‌:FAM作为供体,CY5作为受体,光谱重叠区需>30%。

‌应用‌:检测蛋白相互作用或构象变化(如酶切激活)。

 

 

问: Sulfo-CY5-NHS与其他磺化染料(如Sulfo-CY3)有何区别?‌

答:‌

‌光谱差异‌:

‌Sulfo-CY3‌:Ex/Em ~550/570 nm(绿光),适合多色实验。

‌Sulfo-CY5‌:Ex/Em ~650/670 nm(远红光),穿透性更强,适合厚组织成像。

 

 

问: Sulfo-CY5-NHS在流式细胞术中信号弱,为什么?‌

答:‌‌可能原因‌:

激光功率不足(需确认仪器是否配备640 nm红色激光)。

检测滤光片不匹配(建议使用670/30 nm通道)。

标记率过低或染料淬灭。

 

问: Sulfo-CY5-NHS能否与生物素(Biotin)联用构建双功能探针?‌

答:‌

‌联用方案‌:

‌分步标记‌:

用Sulfo-CY5-NHS标记蛋白的氨基。

用生物素-NHS标记同一蛋白的赖氨酸其他位点(需控制pH和摩尔比)。

‌应用‌:结合荧光成像与链霉亲和素磁珠富集(如外泌体追踪)。

 

问: 如何评估Sulfo-CY5-NHS的光稳定性?‌

答:‌

‌测试方法‌:

‌连续光照‌:用共聚焦显微镜以最大激光功率持续照射样品,记录荧光衰减曲线(CY5半衰期通常 >5分钟)。

‌定量标准‌:信号衰减至50%所需时间 >30秒视为合格(需避光保存样品)。

 

问: Sulfo-CY5-NHS能否用于标记脂质体或胶束?‌

答:‌

‌标记策略‌:

‌氨基修饰脂质体‌:在脂质体配方中加入含氨基的磷脂(如DSPE-PEG-NH2)。

‌直接偶联‌:将Sulfo-CY5-NHS与氨基磷脂在pH 8.5缓冲液中避光反应2小时。

‌纯化‌:透析或超滤去除游离染料。

 

问: Sulfo-CY5-NHS在细胞毒性实验中是否干扰结果?‌

答:‌

‌潜在干扰‌:

‌高浓度(>50 μM)‌:可能因活性基团残留导致假阳性毒性信号。

‌建议‌:

标记后充分透析去除未反应染料。

设置染料单独处理的空白对照组。

 

问: 如何实现Sulfo-CY5-NHS与荧光素(FITC)的双标记?‌

答:‌

‌双标记设计‌:

‌光谱分离‌:FITC(Ex/Em 495/520 nm)与Sulfo-CY5(Ex/Em 650/670 nm)无交叉。

‌反应顺序‌:

先用Sulfo-CY5-NHS标记氨基,再用FITC-NHS在pH 7.4下标记巯基(需引入巯基基团)。

‌检测‌:流式细胞仪或共聚焦显微镜分通道采集。

 

问: 如何利用Sulfo-CY5-NHS标记活体动物中的特定细胞类型?‌

答:‌

‌靶向标记方案‌:

‌抗体偶联‌:将Sulfo-CY5-NHS标记到靶细胞特异性抗体。

‌体内注射‌:尾静脉注射后,通过活体成像仪追踪荧光分布。

‌时间窗口‌:最佳成像时间为注射后6-24小时(平衡背景清除与靶标富集)。

 

问: Sulfo-CY5-NHS能否标记小分子药物(如阿霉素)?‌

答:‌

‌氨基要求‌:小分子需含伯氨基(如阿霉素无氨基,需化学修饰引入氨基)。

‌标记步骤‌:将Sulfo-CY5-NHS与氨基化药物在DMSO/PBS混合液中反应,纯化后用于递送追踪。

 

问: Sulfo-CY5-NHS标记的样品发生光漂白后能否恢复信号?‌

答:‌

‌光漂白特性‌:CY5染料光漂白后不可逆,但可通过以下方法减少影响:

‌成像优化‌:降低激光功率,缩短曝光时间。

 

【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)

标签: 星戈瑞 CY5 NHS‌
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