Sulfo-CY5-NHS磺化水溶性CY5-NHS酯科研产品问答,仅科研:
问: Sulfo-CY5-NHS与普通CY5-NHS的主要区别是什么?适用场景有哪些?
答:
区别:
水溶性:Sulfo-CY5-NHS因磺酸基修饰,可直接溶于水或缓冲液,无需有机溶剂(如DMSO)。
电荷:带负电荷,减少与生物分子非特异性吸附,适合标记敏感蛋白或活细胞。
适用场景:
需避免有机溶剂的标记(如抗体、酶活性敏感分子)。
活细胞表面标记或体内注射(降低毒性)。
问: Sulfo-CY5-NHS在体内成像中的代谢途径是什么?
答:
代谢特点:
快速清除:小分子探针经肾脏排泄(数小时内),大分子(如抗体)通过肝胆代谢(半衰期数天)。
成像窗口:建议注射后6-24小时采集信号(平衡背景与靶标富集)。
问: Sulfo-CY5-NHS能否用于FRET(荧光共振能量转移)实验?
答:
FRET设计:需配对供体染料(如FAM,Ex/Em ~495/520 nm):
供体-受体对:FAM作为供体,CY5作为受体,光谱重叠区需>30%。
应用:检测蛋白相互作用或构象变化(如酶切激活)。
问: Sulfo-CY5-NHS与其他磺化染料(如Sulfo-CY3)有何区别?
答:
光谱差异:
Sulfo-CY3:Ex/Em ~550/570 nm(绿光),适合多色实验。
Sulfo-CY5:Ex/Em ~650/670 nm(远红光),穿透性更强,适合厚组织成像。
问: Sulfo-CY5-NHS在流式细胞术中信号弱,为什么?
答:可能原因:
激光功率不足(需确认仪器是否配备640 nm红色激光)。
检测滤光片不匹配(建议使用670/30 nm通道)。
标记率过低或染料淬灭。
问: Sulfo-CY5-NHS能否与生物素(Biotin)联用构建双功能探针?
答:
联用方案:
分步标记:
用Sulfo-CY5-NHS标记蛋白的氨基。
用生物素-NHS标记同一蛋白的赖氨酸其他位点(需控制pH和摩尔比)。
应用:结合荧光成像与链霉亲和素磁珠富集(如外泌体追踪)。
问: 如何评估Sulfo-CY5-NHS的光稳定性?
答:
测试方法:
连续光照:用共聚焦显微镜以最大激光功率持续照射样品,记录荧光衰减曲线(CY5半衰期通常 >5分钟)。
定量标准:信号衰减至50%所需时间 >30秒视为合格(需避光保存样品)。
问: Sulfo-CY5-NHS能否用于标记脂质体或胶束?
答:
标记策略:
氨基修饰脂质体:在脂质体配方中加入含氨基的磷脂(如DSPE-PEG-NH2)。
直接偶联:将Sulfo-CY5-NHS与氨基磷脂在pH 8.5缓冲液中避光反应2小时。
纯化:透析或超滤去除游离染料。
问: Sulfo-CY5-NHS在细胞毒性实验中是否干扰结果?
答:
潜在干扰:
高浓度(>50 μM):可能因活性基团残留导致假阳性毒性信号。
建议:
标记后充分透析去除未反应染料。
设置染料单独处理的空白对照组。
问: 如何实现Sulfo-CY5-NHS与荧光素(FITC)的双标记?
答:
双标记设计:
光谱分离:FITC(Ex/Em 495/520 nm)与Sulfo-CY5(Ex/Em 650/670 nm)无交叉。
反应顺序:
先用Sulfo-CY5-NHS标记氨基,再用FITC-NHS在pH 7.4下标记巯基(需引入巯基基团)。
检测:流式细胞仪或共聚焦显微镜分通道采集。
问: 如何利用Sulfo-CY5-NHS标记活体动物中的特定细胞类型?
答:
靶向标记方案:
抗体偶联:将Sulfo-CY5-NHS标记到靶细胞特异性抗体。
体内注射:尾静脉注射后,通过活体成像仪追踪荧光分布。
时间窗口:最佳成像时间为注射后6-24小时(平衡背景清除与靶标富集)。
问: Sulfo-CY5-NHS能否标记小分子药物(如阿霉素)?
答:
氨基要求:小分子需含伯氨基(如阿霉素无氨基,需化学修饰引入氨基)。
标记步骤:将Sulfo-CY5-NHS与氨基化药物在DMSO/PBS混合液中反应,纯化后用于递送追踪。
问: Sulfo-CY5-NHS标记的样品发生光漂白后能否恢复信号?
答:
光漂白特性:CY5染料光漂白后不可逆,但可通过以下方法减少影响:
成像优化:降低激光功率,缩短曝光时间。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)