CY7-NHS ester科研产品问答,近红外荧光标记活性酯,仅科研:
问: CY7-NHS 的主要优势是什么?适合哪些实验?
答:
优势:
近红外荧光:激发/发射波长 ~750/773 nm,穿透性强,适用于小动物活体成像(减少组织自发荧光干扰)。
高灵敏度:适合低丰度靶标的检测(如肿瘤微转移)。
共价标记:NHS酯基团可特异性偶联蛋白质、抗体、多肽等分子的伯氨基(-NH₂)。
应用:体内外荧光成像、流式细胞术(需配备近红外通道)、药物递送追踪、分子探针标记。
问: CY7-NHS能否与其他荧光染料(如FITC、CY5)同时使用?
答:
多色标记可行性:
光谱兼容性:CY7(~773 nm)与CY5(~670 nm)、FITC(~520 nm)无显著光谱重叠,可多通道同步检测。
实验设计:确保仪器具备近红外检测通道(如IVIS光谱成像系统、共聚焦显微镜)。
问: 能否用CY7-NHS标记纳米颗粒(如脂质体、PLGA)?
答:
可行方案:
表面氨基修饰:若纳米颗粒含氨基(如壳聚糖包被),可直接偶联。
预活化法:对无氨基的颗粒,先用EDC/NHS引入羧基,再连接CY7-NHS(需两步反应)。
注意事项:标记后需离心或透析去除未反应染料,避免背景干扰。
问: CY7-NHS是否具有光毒性?能否用于活细胞成像?
答:
光毒性:CY7在近红外区光毒性极低,适合长时间活细胞成像。
实验建议:
使用低激光功率(<10%)。
缩短曝光时间,避免光漂白。
问: CY7-NHS与CY5-NHS的主要区别是什么?
答:
光谱特性:
CY5:激发/发射 ~650/670 nm(远红光)。
CY7:激发/发射 ~750/773 nm(近红外)。
应用场景:
CY5适用于体外高分辨率成像(如共聚焦)。
CY7更适合深组织穿透的活体成像。
问: CY7-NHS能否用于多模态成像(如荧光-光声联合成像)?
答:
适用性:是!CY7在近红外二区(NIR-II)具有光声信号,可与荧光成像结合:
光声成像:利用其高吸光系数(~247,000 M⁻¹cm⁻¹)增强肿瘤或血管对比度。
实验设计:标记靶向分子(如RGD肽)后,注射至荷瘤小鼠,同步采集荧光和光声信号。
问: 如何提高CY7-NHS标记的探针在体内的循环稳定性?
答:
策略:
PEG化修饰:在标记后添加聚乙二醇(PEG)链,减少网状内皮系统(RES)清除。
纳米颗粒包裹:将CY7标记物封装在脂质体或PLGA中,延长半衰期。
靶向配体:偶联肿瘤特异性配体(如叶酸),加速靶组织富集,降低背景滞留。
问: CY7-NHS标记的细胞膜探针是否影响细胞活力?
答:
影响评估:
低浓度(<10 μM):通常不影响细胞活性(需MTT或活死染色验证)。
高浓度:可能因染料聚集或光毒性导致膜损伤。
建议:标记后避光孵育,标记时间控制在30分钟以内。
问: 如何验证CY7-NHS标记的抗体在组织切片中的特异性?
答:
验证方法:
阻断实验:预孵育过量未标记抗体,观察荧光信号是否减弱。
免疫组化对照:用同型对照抗体标记,排除非特异性结合。
质谱验证:从标记样品中提取蛋白,鉴定CY7修饰位点。
问: CY7-NHS能否用于光热治疗(Photothermal Therapy, PTT)?
答:
潜力:CY7的吸收峰(~747 nm)与近红外激光匹配,可产生局部升温:
实验设计:标记肿瘤靶向纳米颗粒,激光照射诱导肿瘤细胞凋亡。
问: 如何检测CY7-NHS标记的外泌体?
答:
标记步骤:
外泌体分离:超速离心或试剂盒提取。
表面氨基活化:用EDC/NHS处理外泌体,暴露氨基。
CY7-NHS偶联:按1:10(外泌体蛋白:染料)摩尔比反应,避光2小时。
纯化:超滤离心(100 kDa)去除游离染料。
检测:纳米流式或活体成像追踪外泌体分布。
问: CY7-NHS与点击化学(Click Chemistry)能否联用?
答:
联用方案:
两步标记法:
先通过CY7-NHS标记含氨基分子。
再通过DBCO或Tetrazine点击化学连接另一功能基团(如生物素)。
应用:构建多功能探针(如同时靶向和成像)。
问: CY7-NHS的荧光信号在酸性微环境中是否稳定?
答:
稳定性:CY7在pH 5.0-9.0范围内荧光强度变化 <5%,适合(pH 6.5-7.0)成像。
淬灭风险:极酸性环境(如溶酶体,pH 4.5)可能轻微减弱信号,需设置pH梯度对照。
问: CY7-NHS能否用于荧光共振能量转移(FRET)实验?
答:
可行性:需配对供体染料(如CY5.5,发射峰~710 nm):
供体-受体对:CY5.5(供体)与CY7(受体)光谱部分重叠,可设计FRET探针。
应用:检测分子构象变化或蛋白相互作用(如酶激活)。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)