CY5.5-NHS酯科研产品技术问答,仅科研:
问:CY5.5-NHS酯与CY5-NHS酯的主要区别是什么?如何根据实验需求选择?
答:
光谱差异:
CY5.5发射波长更长(Em≈710 nm),适合深层组织成像(如小动物活体);
CY5发射峰在670 nm,穿透深度较浅(适用于离体组织或近表面成像)。
选择依据:
需穿透皮肤或骨骼(如脑部成像)→ CY5.5;
需与其他染料(如FITC、CY3)多路复用→ CY5;
避免自发荧光干扰→ CY5.5(近红外二区成像背景更低)。
问:CY5.5能否与CY7或ICG染料同时用于多通道成像?
答:
光谱兼容性:
CY5.5(Ex/Em≈675/710 nm)与CY7(Ex/Em≈750/780 nm)可分离;
CY5.5与ICG(Ex/Em≈780/820 nm)需注意发射滤光片交叉(推荐使用窄带滤光片,如710/40 nm和800/40 nm)。
实验设计:
使用光谱解卷积软件(如LI-COR Odyssey或IVIS Living Image)区分信号。
问:CY5.5标记的纳米颗粒出现聚集,如何解决?
答:
预防措施:
标记前纯化纳米颗粒(去除杂质);
反应体系中加入0.05% Tween-20或Pluronic F-68;
控制标记密度(每个颗粒≤3个染料分子)。
补救方案:
超声处理(20 kHz,10秒脉冲)分散聚集体;
通过动态光散射(DLS)验证粒径恢复。
问:CY5.5-NHS能否用于标记脂质体?有何注意事项?
答:
可行方案:
直接标记:将CY5.5-NHS与脂质体表面氨基(如DSPE-PEG-NH2)反应;
间接标记:预合成CY5.5-马来酰亚胺,与硫醇化脂质体偶联。
注意事项:
避免高温(脂质体可能破裂),反应温度≤37°C;
游离染料需通过透析或凝胶色谱彻底去除。
问:CY5.5-NHS标记小分子药物(如激酶抑制剂)时如何避免非特异性结合?
答:
策略:
位点保护:在药物活性位点(如结合口袋)预先加入竞争性小分子阻断剂;
定向标记:通过引入短链PEG(连接CY5.5与药物,减少空间位阻;
验证:通过HPLC-MS检测标记产物纯度,结合体外活性实验验证功能保留。
反应缓冲液:使用低离子强度缓冲液,避免盐析干扰。
问:CY5.5标记细胞膜时如何提高特异性?
答:
膜定位方案:
非穿透性标记:在4°C下反应(抑制胞吞作用),仅标记膜表面氨基;
靶向修饰:使用膜锚定肽与CY5.5偶联;
验证:共聚焦显微镜下与膜染料(如DiD)共定位分析。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)