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FITC-Dextran常见产品问答,荧光素标记葡聚糖

时间:2025-03-27    阅读:58    点赞:0

星戈瑞FITC-Dextran荧光素标记葡聚糖-常见产品问答,仅科研:

问: FITC-Dextran的主要应用领域是什么?‌

答:‌ FITC-Dextran用于:

细胞通透性研究‌:通过测量细胞或组织对FITC-Dextran的摄取或渗漏,评估屏障功能(如血脑屏障、肠黏膜屏障)。

血管渗漏检测‌:在炎症或肿瘤模型中,监测血管通透性变化。

药物递送追踪‌:标记纳米颗粒或脂质体,观察其在体内的分布和释放。

溶酶体/内吞途径研究‌:利用不同分子量的Dextran研究细胞内吞机制。

FITC-Dextran 

问: 如何选择FITC-Dextran的分子量(如4kDa、70kDa)?‌

答:‌ 分子量选择取决于实验目的:

低分子量(4kDa-20kDa)‌:适用于细胞膜通透性检测(小分子更易穿过孔隙)。

中高分子量(40kDa-150kDa)‌:用于研究血管渗漏或巨噬细胞内吞(大分子难以被动扩散)。

超高分子量(>500kDa)‌:标记细胞外基质或研究吞噬作用。

 

问: FITC-Dextran的激发/发射波长是多少?适合哪些检测仪器?‌

答:‌ 最大激发波长~495 nm,发射波长~520 nm(绿色荧光),适用于:

荧光显微镜(FITC/GFP通道)

流式细胞仪(488 nm激光器)

酶标仪(荧光模式)

 

问: 实验中使用FITC-Dextran是否需要避光操作?如何保存?‌

答:‌ 是!FITC对光敏感,实验全程需避光。建议:

保存条件‌:粉末或溶液均需避光,-20°C干燥保存,建议现用现溶。

 

问: FITC-Dextran能否用于活体动物成像?‌

答:‌ 可以,但需注意局限性:

优点‌:无毒、生物相容性高,适用于短期(数小时)体内追踪。

缺点‌:激发波长穿透性差(适合浅表组织),易被肾脏快速清除。

替代方案‌:长期或深部成像建议改用近红外染料(如CY5.5- Dextran、CY7- Dextran、ICG- Dextran)。

 

问: 如何避免FITC-Dextran实验中的背景荧光干扰?‌

答:‌ 可能原因及解决方案:

游离FITC残留‌:纯化样本(透析、超滤或凝胶柱层析)。

血清干扰‌:实验前用无血清培养基清洗细胞/组织。

自发荧光‌:设置空白对照,优化滤光片波长。

 

问: FITC-Dextran与游离FITC有什么区别?‌

答:‌ 关键区别在于分子大小和滞留时间:

FITC-Dextran‌:大分子(依赖分子量),无法自由穿过细胞膜,可长时间滞留于溶酶体。

游离FITC‌:小分子(389 Da),易穿过膜结构,但会被快速代谢或外排。

 

问: 标记后荧光信号弱可能是什么原因?‌

答:‌ 可能原因:

光淬灭‌:操作中未避光,或激光功率过高。

pH影响‌:FITC在酸性环境(如溶酶体)中荧光减弱,需调整检测条件。

样本降解‌:长期保存或反复冻融导致Dextran断裂。

 

问: FITC-Dextran 是否适用于固定后的细胞或组织样本?‌

答:‌ 可以,但需注意:

‌固定前标记‌:建议先在活细胞中完成FITC-Dextran内吞或渗透实验,再进行固定(如4%多聚甲醛),避免固定剂破坏膜结构导致假阳性。

‌固定后染色‌:若需固定后标记(如血管渗漏检测),需使用低浓度透化处理,但可能影响定量结果。

 

问: 如何定量检测样本中FITC-Dextran的浓度?‌

答:‌ 常用方法:

‌荧光分光光度计‌:测量样本在495/520 nm处的荧光强度,与标准曲线比对。

‌酶标仪‌:使用96孔板进行高通量检测。

‌HPLC‌:结合凝胶色谱柱分离游离FITC与FITC-Dextran,精确计算浓度。

 

问: 能否与其他荧光探针(如DAPI、Cy5)同时使用?如何避免光谱串扰?‌

答:‌ 可以,但需优化通道设置:

‌DAPI(蓝色)‌:激发/发射为358/461 nm,与FITC无重叠。

‌Cy5(红色)‌:激发/发射为650/670 nm,需使用多通道滤光片系统。

‌注意‌:避免同时使用FITC和GFP探针(光谱高度重叠)。

 

问: 长期追踪FITC-Dextran(如数天)是否可行?‌

答:‌ 不推荐。原因:

‌代谢降解‌:Dextran会被溶酶体酶缓慢降解,释放游离FITC(导致信号定位不准确)。

‌光漂白‌:长期光照下FITC荧光易淬灭。

‌替代方案‌:改用化学稳定性更高的染料近红外荧光染料(如Cy5、Cy7)。

 

问: FITC-Dextran是否适用于斑马鱼或小鼠胚胎模型?‌

答:‌ 是的,但需调整方法:例如|(仅参考):

‌斑马鱼‌:显微注射至血液循环或卵黄囊,观察血管发育或渗透性。

‌小鼠胚胎‌:母体静脉注射后,通过胎盘屏障检测胚胎血管系统(需控制剂量避免毒性)。

 

问: 是否可用FITC-Dextran研究血脑屏障(BBB)的通透性?‌

答:‌ 是的。

‌体内模型‌:静脉注射后,取脑组织匀浆检测荧光强度,或通过活体成像观察渗漏。

‌体外模型‌:使用Transwell培养脑微血管内皮细胞,测量FITC-Dextran从顶端到底侧的转运量。

 

【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考!(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)

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