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FITC与抗体交联原理是什么?简述来了

时间:2022-07-28    阅读:865    点赞:0

FITC,中文名异硫氰酸荧光素,又称为荧光素-5-异硫氰酸盐,英文全称Fluorescein Isothiocyanate,其形态为黄色粉末,具有高吸收率、荧光量子产率和良好的水溶性等特点,是生物学中应用的一种绿色荧光素衍生物。

 

分子式:C21H11NO5S

分子量:389.38

CAS:27072-45-3 

最大吸收光波长为490-495nm

最大发射光波长为520-530nm

水溶性:易溶于水和酒精溶剂 

外观:黄色或橙黄色结晶粉末  

储存条件:-20℃干燥避光保存

 FITC

 

异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体,凝集素在内的蛋白标记。除了用作蛋白质标记物,还可用作蛋白质荧光示踪剂,标记抗体用以快速鉴定病原体,以及用于蛋白质和多肽(HPLC)的微量测序。

FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,最大激发波长为494 nm。

性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子,被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析,从而对抗原进行定性、定位或定量。

 

 

科研:

它能与各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光,加酸后析出沉淀,荧光消失。

通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的R氨基与FITC荧光素的硫碳胺键结合,形成FITC蛋白质结合物。


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