荧光抗体技术
1标本的制备
荧光抗体技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。因此标本制作的好坏直接影响到检测的结果。在制作标本过程中应力求保持抗原的完整性,并在染色、洗涤和封埋过程中不发生溶解和变性,也不扩散至临近细胞或组织间隙中去。标本切片要求尽量薄些,以利抗原抗体接触和镜检。标本中干扰抗原抗体反应的物质要充分洗去,有传染性的标本要注意。常见的临床标本主要有组织、细胞和细菌三大类。按不同标本可制作涂片、印片或切片。组织材料可制备成石蜡切片或冷冻切片。石蜡切片因操作烦琐,结果不稳定,非特异反应强等已少应用。组织标本也可制成印片,方法是用洗净的玻片轻压组织切面,使玻片粘上1~2层组织细胞。细胞或细菌可制成涂片,涂片应薄而均匀。涂片或印片制成后应迅速吹干、封装,置一10°C保存或立即使用。
2荧光抗体染色
于已固定的标本上滴加经适当稀释的荧光抗体,置湿盒内,在一定温度下温育一定时间,一般25。C~37°C30rain,不耐热抗原的检测则以4°C过夜为宜,用PBS充分洗涤,干燥。
3试验类型
3.1直接法直接滴加2-4个单位的标记抗体于标本区,使之与抗原发生特异性结合,漂洗,干燥,封载。该法操作简便,特异性高,非特异炭光染色因素少;纵点是敏感度偏低,每检查—种抗原需制备相应的特异荧光抗体.
3.2间接法
染色程序分为两步,第一步,用末知未标记的抗休(街检标木)加到己知抗京标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去木结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、lgM抗体。如果第一生发生丁抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和己结合抗京的抗体进一步结合,从而可空定末知抗体,该万法的优点为制备一种标记的抗体,即可用于多和抗原系统的检测。