异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)
异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,发射波长为520 nm的荧光染料,是目前常用的荧光标志物;它的激发波长接近488 nm,光量子得率高,但受pH影响较大。随着PH的降低而减弱,因此,在使用FITC时需格外注意溶液的酸碱度。
四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸(TRITC)
四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸(TRITC) 是经常与 FITC 同时使用的另一种染料,由波长为 550nm的绿色光谱中的光所激发,其发射波长为573 nm。TRITC (479 g/mol) 并非荧光素,而是罗丹明家族的衍生物,罗丹明也具有一个大的共轭芳香电子系统,正是该系统引发了它们的荧光行为。
花菁染料CY系列
CY系列染料是花菁染料的系列衍生物,包括CY2, CY3, CY5, CY5.5, CY7 等,CY染料标记的抗体易于黏附在单核细胞上,造成非特异性结合,但在粒细胞上的黏附程度低,非特异性染色少。
花菁染料可以通过其反应基团与核酸或蛋白相连。例如,采用了蛋白标记的马来酰亚胺基团。附着蛋白质的构象改变会导致荧光发射产生阳性或阴性变化。其中,Cy5 对其周边电子环境非常敏感,该特征可用于酶测定。此外,Cy3 和 Cy5 还可用于 FRET 试验。花菁染料是一种相对较老的荧光染料,但却是其他荧光染料在亮度、耐光性、量子产率等方面得以改善的基础。