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荧光蛋白标记技术原理及其应用

时间:2023-02-27    阅读:2251    点赞:0

蛋白标记的主要目的是监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。

 

有多种蛋白质标记技术可以在蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能,乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。有多种类型的标记物和标记方式可供选择,下面简单介绍几种方法:

 

 

1代谢标记策略

代谢标记策略是一种体内标记方法,在这种方法中,细胞被“喂养”了化学标记的营养物,然后这些标记物被掺入新合成的蛋白质、核酸或代谢物中。然后,我们可以收集细胞并分离这些分子以获得细胞生物过程的全局视图。

 

 

2荧光标记策略

自发荧光蛋白、小分子荧光标志物染料、纳米晶体材料(即量子点材料)、小分子蛋白质标签等等这些材料都可以作为荧光标志物,结合荧光成像检测仪器可以对目标蛋白的表达情况、细胞中的定位情况、相互作用、活性状态等指标进行研究。

 

 

3其他标记

酶蛋白偶联物以辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷脂酶(AP)为代表的酶标记物适用于与蛋白偶联并为免疫检测制备抗体偶联物。这两种标记物常被用于标记抗体后用作ELISA检测。

 

 

蛋白标记应用

监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。

蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。

蛋白荧光标记已成为研究蛋白质互作、酶活性、活体示踪以及细胞分选重要工具。


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