生物素标记蛋白可以解决蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能,乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。
生物素(Biotin)是蛋白质检测、纯化和固定的有用标签,因为它可以高亲和力地与链霉亲和素(Avidin)和链霉亲和素(Streptavidin,SA)结合。生物素-亲和素的亲和力至少比抗原-抗体结合力高百万倍,这种相互作用是蛋白质和配体之间较强的非共价相互作用之一。另外,生物素(MW=244.3Da)比酶标记物小得多,因此不太影响蛋白质本身的天然功能。总之,这些特征使得生物素-亲和素策略成为许多检测和固定应用的理想选择。
生物素化蛋白质是生物素与蛋白质共价结合的产物,因为生物素化蛋白质同时具备了高亲和力、高特异性和高灵敏度的优点,所以它提高了基于免疫方法的检测、纯化蛋白质技术的效率。
生物素标记荧光蛋白的应用:生物素-亲和素系统用于流式细胞术、荧光成像、蛋白质印迹和ELISA检测,以增加信号输出和更高的灵敏度。亲和素或链霉亲和素的荧光缀合物用于检测生物素化的生物分子。亲和素或链霉亲和素的酶缀合物,通常用于蛋白质印迹,ELISA和原位杂交成像应用。亲和素或链霉亲和素缀合的磁珠和树脂可用于分离蛋白质、细胞和DNA,也可用于免疫分析或生物筛检。