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如何选择合适的荧光蛋白及注意事项

时间:2022-09-14    阅读:902    点赞:0

荧光蛋白主要集中于提高荧光蛋白的亮度,改变Stokes位移(指激发峰与发射峰之间的距离)和光谱特性,以及寻找新型光转换/光激活荧光蛋白等方面。

 

在实验中如何选择合适的荧光蛋白?

 

1.根据现有的激光器(405,488,561,647)进行选择,保证所选荧光染料能被成像仪器激发和检测到;

 

2.每种荧光染料都有自己的光谱特性,需要进行多色荧光成像时,尽量避免选择光谱相近的荧光染料以防串色;

 

3.结合自己的实验需求,根据染固定细胞还是染活细胞,选择相应的染料;

 

4.综合染料的物理化学性质,优先考虑荧光亮度高、光稳定性强的染料;

 

5.尽量选择无细胞毒性或不影响细胞状态的染料;

 

6.建议选择多管分装的粉末包装形式,其稳定性和保质期优于抗体溶液。


小注意:

1.购买的抗体在使用前,要仔细阅读说明书,了解清楚染料的相关信息;


2.建议多管分装保存,注意封口、避光并低温保存,尽量避免反复冻融;


3.首次使用的荧光染料,根据说明书或者参考文献,摸索确定染色浓度和染色时间;


4.染色完成后,利用缓冲液少量多次地洗涤,可以降低背景荧光;


5.要使用抗荧光淬灭剂进行封片,并尽快取图。

 


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