荧光蛋白主要集中于提高荧光蛋白的亮度,改变Stokes位移(指激发峰与发射峰之间的距离)和光谱特性,以及寻找新型光转换/光激活荧光蛋白等方面。
在实验中如何选择合适的荧光蛋白?
1.根据现有的激光器(405,488,561,647)进行选择,保证所选荧光染料能被成像仪器激发和检测到;
2.每种荧光染料都有自己的光谱特性,需要进行多色荧光成像时,尽量避免选择光谱相近的荧光染料以防串色;
3.结合自己的实验需求,根据染固定细胞还是染活细胞,选择相应的染料;
4.综合染料的物理化学性质,优先考虑荧光亮度高、光稳定性强的染料;
5.尽量选择无细胞毒性或不影响细胞状态的染料;
6.建议选择多管分装的粉末包装形式,其稳定性和保质期优于抗体溶液。
小注意:
1.购买的抗体在使用前,要仔细阅读说明书,了解清楚染料的相关信息;
2.建议多管分装保存,注意封口、避光并低温保存,尽量避免反复冻融;
3.首次使用的荧光染料,根据说明书或者参考文献,摸索确定染色浓度和染色时间;
4.染色完成后,利用缓冲液少量多次地洗涤,可以降低背景荧光;
5.要使用抗荧光淬灭剂进行封片,并尽快取图。