荧光免疫技术是根据抗原抗体反应的原理，将不影响抗原抗体活性的免疫荧光色素标记在抗体或抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。该法包括直接法和间接法。
荧光素标记
一、 原理
目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(FITC)或罗丹明(RB200)。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。
二、 操作步骤
1、 将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜；
2、 透析后抗体液移入小烧杯中；
3、 称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC～1mg/1ml DMSO)使终浓度为1mgFITC／1mlDMSO
（FITC／IgG比例:如IgG浓度为1mg／ml，FITC／IgG比例约为50μgFITC／mgIgG；如IgG为5～10mg／ml，则比例为25μgFITC／ml IgG）
4、 在10ml小烧杯中先放入抗体；
5、 按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中；
6、 将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h；
7、 用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱；
8、 收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F／P比值。第二个荧光素峰为游离荧光素。
(三) 试剂器材
1、纯化的多克隆抗体或单克隆抗体。
2、FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它荧光色素。
3、PBS、DMSO
4、PH9～9.5碳酸盐缓冲液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸馏水至500ml。
5、PD10柱(Sephadex G25柱)
6. 磁力搅拌器，紫外分光光度计等
(四) 注意事项
1. FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。
2. FITC-DMSO液要临用时配制。
3. 碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
