荧光抗体技术是以荧光素标记抗体,与切片中组织或细胞抗原反应,经洗涤分离后,在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位,借此对组织细胞抗原进行定性和定位检测,或对自身抗体进行定性和滴度测定,此技术亦称荧光免疫组织化学技术。该法包括直接法和间接法。
免疫荧光常见问题
1、信号微弱/没有信号:
样品保存不当或保存期过长、固定不足、抗体使用不当、稀释浓度不当、错误激发波长、目的蛋白表达较低。
2、高背景:
样品自发荧光、样品封闭不充分、抗体稀释浓度过高、样品变干、清洗时间不足、二抗交叉效应、非特异性抗体结合。
3、细胞/组织形态受到破坏:
组织切片从玻片上脱落或者玻片上有气泡、切片撕裂或者有褶皱、固定不充分。