5-FAM 5-羧基荧光素 76823-03-5
链霉亲和素Streptavidin可以和抗体、酶或其他蛋白结合，并且不会影响蛋白的生物活性，单个抗体分子可以同时连接数十个生物素或是链霉亲和素分子，并且还可以和各种荧光素结合，形成一种生物反应系统，并广泛应用于微量抗原、抗体及受体的定量，定性检测及定位观察研究，也可以制成亲和介质用于各种反应体系中的反应物的分离和纯化。
当一个物体吸收了短波光的能量，它能发射出比原来吸收的波长更长的光。具有这种性质的物质或者分子称为荧光素或荧光染料。
可选用的荧光染料多种多样，由于他们的分子结构不同，其荧光激发谱与发射谱也各异。选择染料或单抗所标记的荧光素必须考虑仪器所配置的激光光源的波长，即染料的激发光谱；仪器激光的激发光波长尽可能接近荧光染料的激发光谱峰值；此外，还要考虑荧光染料的发光颜色，即染料的发射光谱，需选择合适波段的检测器检测相应的荧光信号。
荧光信号也分为两种：一种是细胞自身就有的荧光在激光照射下发出的荧光信号，称为细胞自发荧光；另一种是人为用特异性荧光素标记细胞，如用荧光素标记的单克隆抗体特异性地结合胞膜、胞质、核膜的相应抗原，这些荧光素通过激光激发产生的信号。荧光信号的强弱反映了细胞抗原的表达含量，通过荧光信号我们可以对细胞亚群和功能进行分析。
FITC异硫氰酸荧光素是目前较为常用的标记抗体的方法，FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶，性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下，FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子，被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力，在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光，通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析，从而对抗原进行定性、定位或定量。
活化的荧光染料，例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）、罗丹明B（Rhodamine B）或Alexa Fluor染料等，可用于标记抗体或蛋白功能基团，生成分子探针并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化的生物分子时，它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针，应用于细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹和酶联免疫吸附实验（ELISA）。
荧光蛋白GFP发展到现在，已有多种光谱区域的荧光蛋白，包括绿色荧光蛋白、蓝色和蓝绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、红色荧光蛋白，不同光谱型的荧光蛋白在亮度、光稳定性、分子大小上有所不同。
常见的荧光染料主要有：荧光素类、罗丹明类、吖啶类、芴类和香豆素类。异硫氰酸酯荧光素(FITC)是常用的蛋白质标记试剂,用于免疫技术和DNA序列测序中。
荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简便等优点。其中常见的是利用荧光标记多肽来检测目标蛋白的活性。除此，多肽的荧光修饰同样是多肽合成领域的内容。荧光标记技术不只局限于蛋白质，它还可以对核酸、聚糖、抗体以及各种活性基团等其他结构进行标记。
