荧光光谱是把荧光的能量--波长关系作出来的关系图,所以想要了解荧光的特点首先就要了解荧光光谱。
一、如何查看荧光光谱?
无论是激发还是发射荧光光谱图,其都是记录发射荧光强度随波长的变化。荧光光谱中纵坐标为强度,横坐标为波长。
首先从图中能获取峰位和半峰宽。峰位的直观体现是荧光的颜色;半峰宽则表示荧光的纯度。因此可以根据这种激发谱线来确定其激发波长,根据其发射谱来确定其发射波长。
二、荧光光谱的分类:
荧光光谱分为:激发光谱(PLE)和发射光谱(PL)。
激发光谱:固定发射光的波长,改变激发光的波长,记录荧光强度随激发波长的变化。
发射光谱:固定激发光的波长,记录不同发射波长处荧光强度随发射波长的变化。
三、激发发射的应用
荧光光谱中的激发和发射分为三个区域,每个区域的应用也不相同。
短波区域(小于650nm)的荧光分子易导致其难与生物体的自体荧光进行区分从而实现对客体的标记和成像。
较高波段(650-900 nm )的分子探针吸收光谱和发射光谱,能够很好的应用于生物成像中,这是由于其对生物体具有较小的光损伤、较深的组织穿透能力以及较低的背景荧光干扰。
长波区域(大于900nm)长的分子探针是通过对长波长荧光染料分子进行功能性衍生设计合成的,因此长波长荧光染料是设计合成探针的基础。