异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate isomer)这是一类试剂的总称,包括异硫氰酸荧光橙红,异硫氰酸荧光黄,异硫氰酸荧光红,异硫氰酸荧光素异构体I等。
抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等,还有一些其他的标记方法例如金标记,星戈瑞分享的是这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
FITC标记抗体的原理:在碱性条件下(pH8.5以上),FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋白的赖氨酸r氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键,成为标记荧光免疫球蛋白,即荧光抗体。一个Ig分子上能标记15~20个FITC分子。
荧光抗体技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。通过对免疫荧光技术的原理、标本制作、实验类型和应用的概述,介绍了免疫荧光技术方法,为实际应用提供参考。
荧光染料是指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。可以单独使用,也可组合成复合荧光染料使用。 有机荧光材料在生物成像方面是种应用性很强的发光材料,可广泛应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性DNA染色、标记蛋白质、活体成像和环境检测等领域研究。
Bodipy氟化硼二吡咯类荧光染料相对比于荧光素、罗丹明或者菁染料有着较高的选择性、高灵敏度、高荧光量子产率、高摩尔消光系数、光学稳定性和对PH不敏感被应用于生物标记、荧光探针及生物成像,星戈瑞荧光stargraydye可提供不同Bodipy荧光染料,荧光波长可定制 从550-800之间,末端可以修饰各种活性基团。
FITC异硫氰酸荧光素是目前较为常用的标记抗体的方法,FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子,被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析,从而对抗原进行定性、定位或定量。
活化的荧光染料,例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、罗丹明B(Rhodamine B)或Alexa Fluor染料等,可用于标记抗体或蛋白功能基团,生成分子探针并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化的生物分子时,它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针,应用于细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹和酶联免疫吸附实验(ELISA)。
常见的荧光染料主要有:荧光素类、罗丹明类、吖啶类、芴类和香豆素类。异硫氰酸酯荧光素(FITC)是常用的蛋白质标记试剂,用于免疫技术和DNA序列测序中。